PRACTICA NO. 2

Rosa de Bengala

Antígeno Brucelar Amortiguado para el Diagnóstico de Brucelosis

 

INTRODUCCION:

 Cada especie de brucella tiene un huesped definitivo, la brucella melitiensis, ganado bovino, la brucella suis, cerdos, la brucella abortus, ganado bovino, entre otras. Estas pueden llegar a infectar incluso a los humanos.

El humano contrae esta infeccion por vias comunes como son: el intestino, mucosas y piel.

Esta bacteria avanza desde su via de entrada hasta el conducto toracico y el torrente sanguineo. su inicio es incidioso con malestar, fiebre, dolor. La fiebre por lo general se eleva por la tarde u desciende por la noche, de ahi el nombre de fiebre ondulante.

Despues de la infeccion inicial en ocaciones se desarrolla una etapa cronica caraterizada por debilidad, mialgias y dolor, entre otras manifestaciones.

Para detectar la presencia de esta bacteria, generalmente se realizan pruebas serologicas, por ejemplo:

Rosa de bengala que es una prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas específicas de Brucella(Brucella melitensis, abortus y suis).

PRINCIPIO

Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas específicas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnóstico temprano.

 

REACTIVOS

• Antígeno Rosa de Bengala

• Control Positivo de Brucella

• Control Negativo de Brucella

MATERIAL

• Placa de prueba. (Se recomienda que siempre se utilice una placa de vidrio para una mejor observación de los resultados).

• Pipetas desechables.

• El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 picolitros.

• Se sugiere utilizar pipetas automáticas preferentemente.

MUESTRA

Se recomienda que únicamente se utilice suero.

Evite la hemólisis o lipemia de las muestras ya que esto puede interferir con los resultados. 

PROCEDIMIENTO

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 picolitros de la muestra del paciente en un círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después coloque 30 picolitros en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Importante: Después de este tiempo la lectura ya no es válida.

REFERENCIA

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se da un espacio para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir, además de que se pueden presentar reacciones no específicas.

* No Aglutinación - Suero Negativo

* Cualquier cantidad de Aglutinación - Presencia de anticuerpos específicos. Suero Positivo

RESULTADOS:

Muestra 1 : Negativo

Muestra 2 : Negativo

Esta es sólo una prueba cualitativa de screening, la cual si resulta positiva debe ser confirmada mediante otra prueba cuantitativa para brucelosis como: Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol.

NOTA: El aislamiento del agente etiológico mediante hemocultivos es de suma importancia.

CONCLUSION:

La respuesta secundaria originada por el complejo Ag-Ac, es una aglutinacion que es usada para la deteccion del antigeno de brucella.
Rosa de bengala detecta solo si esta presente o no la bacteria. Aunque, es un metodo con una especificidad alta, suele presentar un reaccion cruzada con las aglutininas de la tularemia y en los sueros positivos deben realizarse pruebas para ambas enfermedades.
El uso de un inmunoensayo suele ser mas especifico y sensible que las pruebas de aglutinacion.  

REFERENCIAS.

John Bernard Henry, El laboratorio en el diagnostico clinico, 1º edision en homenaje a Todd-Sanford y Davidsohn. Maban.


Laboratorios Licon, S.A., Rosa de bengala.