APLICAR TECNICAS DE BANCO DE SANGRE

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO. 199

¨EMILIANO ZAPATA SALAZAR¨

 

 

APLICAR TECNICAS DE BANCO DE SANGRE

DR. VICENTE MARTINEZ FRAGOSO

5º ¨DM¨

LAB. CLINICO

KARINA SIMON MARQUEZ

2011-2012

 

 

 

PRACTICA NO. 1

VDRL-USR

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y LCR (no requiere reconstitución).

 INTRODUCCION:

La sífilis (chancro duro) es una enfermedad causada por la bacteria Treponema pallidum.

Considerada una enfermedad de transmision sexual, la cual se puede reducir con el uso de preservativos, aunque tambien esta enfermedad puede ser transmitida de la madre al bebe durante el embarazo (sifilis congenita).

La sifilis consiste en tres etapas , dentro de las cuales puede haber signos y sintomas, o bien ser asintomatica (sifilis latente). 

Sifilis primaria:  se produce un chancro indoloro que puede aparecer en cualquier parte del cuerpo, principalmente en el area de contacto con la bacteria, por lo general desaparece dentro de las 6 semanas. Sin embargo la persona continua  infectada si no es tratada.

Sifilis secundaria: las erupciones cutaneas son caracteristicas y pueden producirse cuando el chancro este cicatrizando o tiempo despues, aunque las erupciones no causan picazon , se les asocia con otros sintomas, como fiebre y fatiga, etc.

Sifilis terciaria: caracterizada por la presencia de lesiones granulomatosas en piel, huesos e higado, ademas, existe un daño en el SNC , lesiones cardiovasculares y si no es tratada causa la muerte.

La técnica empleada para su determinación es el VDRL (enfermedades detectadas de transmisión sexual). Que establece la floculación en placa (cuantitativa) del Ag con cardiolipina y lecitina, el VDRL es una prueba serologica con antigenos no treponemicos.

Floculación: precipitado de partículas finas en el caso pruebas serológicas.

DESARROLLO:

REACTIVOS Y MATERIAL:

§ Antígeno de suspensión estabilizado (VDRL)

§ Control positivo     

§ Control negativo

§ Pipetas desechables

§ Placa cóncava 

§  Microscopio

Obtención de la   muestra:

Obtener 3.0 ml de sangre por punción venosa 

Centrifugar y separar el suero.

 

Método cualitativo:

Procedimiento:

♎ En un anillo de la placa cóncava deposite 0.05ml de suero problema.

   ♎ En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otro una gota de control negativo. 

  ♎ Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado a cada uno de los anillos.

  ♎ Agitar durante 4 minutos ya sea manualmente o con un agitador mecánico.

   ♎ Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10x.

Interpretación:

Control positivo:

Presencia de floculación mediana o grande.

Control negativo:

Ausencia de floculación.

RESULTADO: 

        Muestra 1: Negativo.

        Muestra 2: Negativo.

El resultado negativo, indica que no hay presencia de anticuerpos treponemicos, debido a que el paciente no ha estado en contacto con la bacteria.

 

En caso de existir resultados positivos se prosigue a un metodo cuantitativo o con otro tipo de prueba serologica (RPR o FTA-ABS). 

Nota:

1. Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.

2. Sueros débiles positivos y con fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente puede presentarse el fenómeno de prozona.

3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 minutos, puede secarse la reacción y dificultar la interpretación.

4. El antígeno en suspensión debe de estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.

CONCLUSION: 

El VDRL, es un metodo que nos indica la presencia de anticuerpos treponemicos,sin embargo, el no ser realizado directamente con antigenos treponemicos, puede llevarnos a resultados falsos positivos. Por tal motivo al obtener la presencia de floculos en el VDRL (presenta mayor sensibilidad en la etapa intermedia de la enfermedad)  se deben establecer pruebas confirmatorias que muestren especificidad y sensibilidad excelente para los anticuerpos de la sifilis. 

 REFERENCIAS.

Geo F. Brooks, et al.: Microbiologia medica de Jawetz, Melnick y Adelberg, 19º edision. El Manual moderno, 2008.

http://www.cdc.gov/std/Spanish/STDFact-Syphilis-s.htm

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/syphilis.html

PRACTICA NO. 2

Rosa de Bengala

Antígeno Brucelar Amortiguado para el Diagnóstico de Brucelosis

 

INTRODUCCION:

 Cada especie de brucella tiene un huesped definitivo, la brucella melitiensis, ganado bovino, la brucella suis, cerdos, la brucella abortus, ganado bovino, entre otras. Estas pueden llegar a infectar incluso a los humanos.

El humano contrae esta infeccion por vias comunes como son: el intestino, mucosas y piel.

Esta bacteria avanza desde su via de entrada hasta el conducto toracico y el torrente sanguineo. su inicio es incidioso con malestar, fiebre, dolor. La fiebre por lo general se eleva por la tarde u desciende por la noche, de ahi el nombre de fiebre ondulante.

Despues de la infeccion inicial en ocaciones se desarrolla una etapa cronica caraterizada por debilidad, mialgias y dolor, entre otras manifestaciones.

Para detectar la presencia de esta bacteria, generalmente se realizan pruebas serologicas, por ejemplo:

Rosa de bengala que es una prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas específicas de Brucella(Brucella melitensis, abortus y suis).

PRINCIPIO

Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas específicas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnóstico temprano.

 

REACTIVOS

• Antígeno Rosa de Bengala

• Control Positivo de Brucella

• Control Negativo de Brucella

MATERIAL

• Placa de prueba. (Se recomienda que siempre se utilice una placa de vidrio para una mejor observación de los resultados).

• Pipetas desechables.

• El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 picolitros.

• Se sugiere utilizar pipetas automáticas preferentemente.

MUESTRA

Se recomienda que únicamente se utilice suero.

Evite la hemólisis o lipemia de las muestras ya que esto puede interferir con los resultados. 

PROCEDIMIENTO

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 picolitros de la muestra del paciente en un círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después coloque 30 picolitros en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Importante: Después de este tiempo la lectura ya no es válida.

REFERENCIA

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se da un espacio para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir, además de que se pueden presentar reacciones no específicas.

* No Aglutinación - Suero Negativo

* Cualquier cantidad de Aglutinación - Presencia de anticuerpos específicos. Suero Positivo

RESULTADOS:

Muestra 1 : Negativo

Muestra 2 : Negativo

Esta es sólo una prueba cualitativa de screening, la cual si resulta positiva debe ser confirmada mediante otra prueba cuantitativa para brucelosis como: Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol.

NOTA: El aislamiento del agente etiológico mediante hemocultivos es de suma importancia.

CONCLUSION:

La respuesta secundaria originada por el complejo Ag-Ac, es una aglutinacion que es usada para la deteccion del antigeno de brucella.
Rosa de bengala detecta solo si esta presente o no la bacteria. Aunque, es un metodo con una especificidad alta, suele presentar un reaccion cruzada con las aglutininas de la tularemia y en los sueros positivos deben realizarse pruebas para ambas enfermedades.
El uso de un inmunoensayo suele ser mas especifico y sensible que las pruebas de aglutinacion.  

REFERENCIAS.

John Bernard Henry, El laboratorio en el diagnostico clinico, 1º edision en homenaje a Todd-Sanford y Davidsohn. Maban.


Laboratorios Licon, S.A., Rosa de bengala.